Novas

Javascript está actualmente desactivado no teu navegador.Algunhas funcións deste sitio web non funcionarán se JavaScript está desactivado.
Rexístrese cos seus datos específicos e co medicamento específico de interese, e relacionaremos a información que proporcione cos artigos da nosa extensa base de datos e enviarémosche unha copia en PDF inmediatamente.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departamento de Enfermidades Infecciosas, Primeiro Hospital Afiliado da Universidade de Suzhou, cidade de Suzhou, provincia de Jiangsu, 215000 Tel.tumores do sistema dixestivo cunha supervivencia global a 5 anos do 14,1%.Moitos pacientes con CHC son diagnosticados nunha fase avanzada, polo que a detección precoz é esencial para reducir a mortalidade por CHC.Ademais dos indicadores de detección de uso habitual, como a alfa-fetoproteína sérica (AFP), a alfa-fetoproteína reactiva á lectina do cristalino (AFP-L3) e a protrombina anormal (proteína II inducida pola deficiencia de vitamina K, PIVKA-II), as técnicas de biopsia de fluídos. Demostrouse que ten un valor diagnóstico na detección de CHC.En comparación cos procedementos invasivos, a biopsia de fluídos pode detectar metabolitos malignos circulantes.As técnicas de biopsia de fluídos detectan células tumorais circulantes, ADN tumoral circulante, ARN circulante e exosomas e utilízanse para a detección precoz, o diagnóstico e a avaliación do pronóstico do CHC.Este artigo revisa a bioloxía molecular e a aplicación de varias técnicas de biopsia de fluídos para illar biomarcadores prometedores que poden ser opcións viables para a avaliación precoz do CHC para mellorar a detección precoz dos grupos de CHC de alto risco.Palabras clave: técnica de biopsia de líquido, carcinoma hepatocelular, grupo de alto risco.
O carcinoma hepatocelular (HCC) é un tumor maligno común do tracto dixestivo, que ocupa o sexto lugar entre os novos casos de tumores malignos tanto en homes como en mulleres.1 En todo o mundo, o cancro de fígado é a terceira causa de morte por cancro despois do cancro de pulmón e colorrectal, e supón o 8,3% das mortes relacionadas co cancro por todas as neoplasias malignas.1 O prognóstico do CHC está estreitamente relacionado coa fase no diagnóstico.As principais razóns da escasa supervivencia no CHC son as metástases intrahepáticas, os trombos do tumor venoso portal e as metástases a distancia que impiden a resección, e moitas destas características xa están presentes nos pacientes no momento do diagnóstico.
Segundo as pautas de diagnóstico e tratamento, os principais factores de risco para desenvolver o CHC son a cirrose do fígado, a infección crónica polo virus da hepatite B (VHB) ou o virus da hepatite C (VHC), a enfermidade do fígado graso alcohólico e a enfermidade do fígado graso non alcohólico (NAFLD). ).2 Ademais, os factores de risco para o CHC inclúen a inxestión de alimentos contaminados con aflatoxinas, a esquistosomiase, outras causas de cirrose, antecedentes familiares de cancro de fígado, diabetes, obesidade, tabaquismo e lesións hepáticas inducidas por fármacos.Os grupos de alto risco de 35 e 45 anos deben facerse controis médicos periódicos.A detección precoz é unha importante estratexia de tratamento precoz para mellorar a supervivencia global dos pacientes con CHC.
Recoméndanse biomarcadores como AFP, AFP-L3 e PIVKA-II para a detección precoz de HCC3,4.As técnicas de biopsia líquida mostraron resultados prometedores no diagnóstico precoz e na avaliación do tratamento.5,6 Realizouse un progreso significativo na biopsia líquida de HCC, que pode ter unha maior sensibilidade e especificidade que os marcadores séricos de uso habitual como AFP (táboa 1).
A AFP é un biomarcador moi utilizado no CHC e actualmente é o biomarcador máis detallado amplamente utilizado para a detección precoz, o diagnóstico e a avaliación da enfermidade.Un nivel de AFP persistentemente elevado considérase un factor de risco para a progresión do CHC.7,8 A taxa de detección do carcinoma hepatocelular pequeno (sHCC) está aumentando co desenvolvemento da ecografía e a tomografía computarizada, e a AFP comprobouse que é particularmente insensible á detección de hHCC na práctica clínica.Segundo un estudo multicéntrico retrospectivo9, a AFP foi positiva no 46% (616/1338) dos casos de CHC e no 23,4% (150/641) dos casos de CHC.Ademais, os niveis de AFP son elevados en pacientes con enfermidade hepática crónica e cirrose.10 Así, a AFP ten un efecto de cribado limitado para o sHCC.11 Segundo as Guías de práctica clínica de Asia-Pacífico para o carcinoma hepatocelular, non se recomenda o uso de AFP.12 A evidencia clínica suxire que PIVKA-II é superior á AFP no tratamento do CHC e que a combinación de PIVKA-II e AFP ten un maior valor diagnóstico no CHC.13 En comparación coa biopsia de tecidos, a biopsia de fluídos detecta principalmente metabolitos asociados ao tumor nos fluídos corporais (sangue, saliva, líquido pleural, líquido cefalorraquídeo ou ouriños) e é menos invasiva para os tecidos.14 Ademais, as biopsias líquidas poden reflectir características malignas non presentes no tecido do tumor primario.15 As biopsias líquidas aínda non se están a probar na práctica clínica para todo tipo de tumores, pero o seu potencial diagnóstico no cancro está a chamar a atención dos oncólogos.16 A biopsia de fluídos pode detectar células tumorais circulantes (CTC), ADN tumoral circulante (ADNc), ARN libre circulante (ARNc) e exosomas.Neste artigo, discutiremos as características, o papel e a aplicación de varias técnicas de biopsia de fluídos na detección precoz de grupos de CHC de alto risco.
O ADN extracelular (cfDNA) en mostras de sangue de individuos sans foi descrito por primeira vez en 1948 por Mandel et al.17 cfDNA é un fragmento de ADN libre de células de aproximadamente 160-180 pb de lonxitude, orixinado principalmente a partir de linfocitos e células mieloides.O ctDNA é un fragmento específico de ADN mutante liberado polas células tumorais ao sangue periférico, que representa a información xenómica das células tumorais despois de certos procesos fisiopatolóxicos, incluíndo a necrose, a apoptose e a excreción.A proporción de ADNc no ADNc total varía moito segundo o tipo de tumor, e os fragmentos de ADNc normalmente teñen menos de 167 pb de lonxitude.18 O estudo de Underhill mostrou que os fragmentos de cfDNA son xeralmente máis curtos que o cfDNA normal.19 En comparación cos individuos sans, a lonxitude total dos fragmentos de cfDNA no sangue dos pacientes con cancro é máis curta, polo que o cfDNA pode usarse como un indicador da detección precoz do tumor.O enriquecemento de certos subconxuntos de lonxitudes de fragmentos de ADNc pode mellorar a detección de ADNc asociado a tumores sólidos non metastásicos.Os estudos demostraron que o ADNc atópase en máis do 75% dos cancros avanzados de páncreas, colon, vexiga, gastrointestinal, fígado, ovario, mama, melanoma e cabeza e pescozo.20,21 Non obstante, a cantidade de ADNc no sangue depende da localización do tumor.22 Nun estudo realizado por Bettegoud, os pacientes con cancro colorrectal, de mama, de fígado, de pulmón e de próstata descubriuse que tiñan niveis máis altos de ADNc no sangue que outros cancros.En cambio, en pacientes con cancro oral, cancro de páncreas, cancro gástrico e glioma, a concentración de ADNc no sangue foi menor.vinte un
Dado que o ADNc contén as mesmas mutacións xenéticas que as células tumorais primarias, o ADNc pódese usar para detectar mutacións específicas de tumores heteroxéneas e cambios epixenéticos, incluíndo a metilación, a hidroximetilación, as variacións de nucleótido único e as variacións do número de copias.vinte tres
A metilación do ADN é un dos cambios epixenéticos máis comúns que produce a represión xénica.En comparación coas células normais, hai diferenzas no nivel global de metilación do xenoma da célula tumoral, especialmente na metilación dos xenes supresores de tumores, que se poden detectar nunha fase temperá, o que suxire que os cambios na metilación do ADN poden ser un indicador de detección de tumorigénesis.Os xenes supresores de tumores asociados co HCC poden ser inactivados pola metilación do promotor, estimulando así a tumorigénesis.24 A metilación do ADN é un marcador ideal para o diagnóstico precoz de tumores debido á súa especificidade tisular, detectabilidade e independencia da idade.Ademais, a metilación do ADN é máis común en comparación coas mutacións somáticas porque hai máis rexións diana e varios sitios CpG alterados en cada rexión do xenoma diana.25 Ademais de múltiples sitios CpG, identificáronse un gran número de loci hipermetilados independentes no ADNc en DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 e RGS10.26 Xu et al.A comparación de mostras de cfDNA de 1098 pacientes con HCC e 835 controis sans comprobouse que os xenes asociados co HCC se correlacionaban fortemente coas correspondentes sinaturas de metilación do cDNA plasmático.25 A partir da análise de laboratorio, desenvolveuse un modelo preditivo que contén 10 marcadores de metilación cunha sensibilidade e especificidade do 85,7% e do 94,3%, respectivamente, e estes marcadores estaban altamente correlacionados coa masa tumoral, o estadio do tumor e a resposta ao tratamento.Estes resultados indican que o uso de marcadores de metilación do ADNc é moi prometedor no diagnóstico, seguimento e prognóstico do CHC.Nun modelo de metilación que consta de tres xenes metilados de forma aberrante (APC, COX2, RASSF1A) e un miARN (miR203) presentado por Lu et al27, a sensibilidade e especificidade do modelo 27 para diagnosticar o HCC asociado ao VHB foron comparables.80%.Ademais, o modelo podería detectar o 75% dos pacientes con CHC non diagnosticados cun nivel de AFP de 20 ng/ml.O xene da proteína 1A da familia de dominios asociados a Ras (RASSF1A) é a principal secuencia de ADN repetitiva do xenoma humano.Araujo et al.concluíron que a hipermetilación do promotor RASSF1A podería ser un biomarcador valioso para a detección precoz do HCC e unha diana molecular potencial para a terapia epixenética.28 Nun estudo, a hipermetilación sérica do promotor RASSF1A atopouse no 73,3% dos pacientes con CHC.29 O elemento 1 de nucleótidos intercalados longos (LINE-1) é outro mediador de retrotransposición moi activo.A hipometilación de LINE-1 atopouse no ADN do 66,7% das mostras de soro de HCC e asociouse con recorrencia precoz e escasa supervivencia despois da resección radical.29 A hipermetilación é un proceso xenético común que xoga un papel único no desenvolvemento da cirrose hepática e do CHC.30 Pola contra, a hidroximetilación é un proceso de desmetilación que induce a reactivación e expresión dos xenes, e a detección do produto 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) neste proceso pódese utilizar para identificar un tumor.A metilación e a hidroximetilación do ADNc están asociadas á tumorigénesis e poden contribuír á detección precoz do HCC.Nun estudo de 2554 suxeitos, atopáronse 31 5-hmC de todo o xenoma en mostras de cfDNA e identificáronse 32 xenes comparando secuencias de 5-hmC en pacientes con CHC e grupos de alto risco, como aqueles con enfermidades crónicas.Modelos diagnósticos de enfermidades hepáticas.e cirrose.Este modelo foi superior á AFP para distinguir o HCC do tecido non tumoral.
As mutacións nas rexións codificantes poden levar a anomalías transcripcionais, que poden provocar cambios nas secuencias de proteínas e, finalmente, a cancro.As variantes dun único nucleótido son importantes marcadores xenómicos para a detección precoz de tumores debido á súa alta fiabilidade tisular e á súa elevada especificidade tumoral e tisular.Numerosos estudos relacionados co HCC que empregan a secuenciación de próxima xeración (NGS) para a secuenciación do exoma e do xenoma completo do cancro identificaron xenes celulares mutados comúns como TP53 e CTNNB1, así como varios incluíndo ARID1A, MLL e IRF2.Os novos xenes, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 e JAK1 mostran taxas de mutación moderadas. A análise da función xenética mutante suxire que as alteracións na remodelación da cromatina, a transdución de sinais Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a vía do ciclo celular P53, os modificadores epixenéticos, as vías do estrés oxidativo, a vía PI3K/AKT/MTOR e a vía RAS/RAF/ A vía da MAPK quinase xoga un papel crucial na oncoxénese do HCC.32,33 Nun estudo no que se detectaron mutacións asociadas a tumores, Huang et al descubriron que a frecuencia de mutacións asociadas a tumores dependentes do ADNc era do 19,5% e a especificidade do 90%. .34 Ademais, os pacientes que experimentaron invasión vascular tiñan máis probabilidades de ter mutacións no ADNc (P=0,041) e unha supervivencia sen recorrencia máis curta (P<0,001). A análise da función xenética mutante suxire que as alteracións na remodelación da cromatina, a transdución de sinais Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a vía do ciclo celular P53, os modificadores epixenéticos, as vías do estrés oxidativo, a vía PI3K/AKT/MTOR e a vía RAS/RAF/ A vía da MAPK quinase xoga un papel crucial na oncoxénese do HCC.32,33 Nun estudo no que se detectaron mutacións asociadas a tumores, Huang et al descubriron que a frecuencia de mutacións asociadas a tumores dependentes do ADNc era do 19,5% e a especificidade do 90%. .34 Ademais, os pacientes que experimentaron invasión vascular tiñan máis probabilidades de ter mutacións no ADNc (P=0,041) e unha supervivencia sen recorrencia máis curta (P<0,001).A análise da función xenética mutante suxire que os cambios na remodelación da cromatina, a sinalización Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a vía do ciclo celular P53, os modificadores epixenéticos, as vías do estrés oxidativo, a vía PI3K/AKT/MTOR e a vía da quinase RAS/RAF/MAPK. un papel crítico na tumorigénesis do HCC.32,33 Nun estudo que atopou mutacións asociadas a tumores, Huang et al.descubriu que a frecuencia de mutacións asociadas a tumores dependentes do ctDNA era do 19,5% e que a especificidade era do 90%..34 кроме тоactor, у пиентов с сосудистой инвазией чаще встречались мутаци ццн ццооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооооо т т т т т т .34 Ademais, os pacientes con invasión vascular tiñan máis mutacións de ADNc (P=0,041) e unha supervivencia sen enfermidade máis curta (P<0,001).A análise funcional dos xenes mutantes revelou a remodelación da cromatina, a sinalización Wnt/β-catenina e JAK/STAT, a vía do ciclo celular P53, modificadores epixenéticos, a vía do estrés oxidativo, a vía PI3K/AKT/MTOR e a vía RAS/RAF/MAPK. A vía quinase xoga un papel fundamental na oncoxénese do HCC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 相关 突变 的 研究 ， ， ， 等 等 发现 发现 相关 相关 依赖于 依赖于 依赖于 的 频率 为 为 为 侵犯 ， ， 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）. 32,33 在 一 项 检测 到 相关 突变 突变 的 ， ， ， 等 等 肿瘤 相关 突变 突变 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 依赖于 突变 的 为 为 为 为 为 为 更 的 更 更 的 的 的 的 的 的 的 的 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯 侵犯短的无复发生存期（P<0,001）。32,33 Nun estudo que atopou mutacións asociadas a tumores, Huang et al.descubriu que as mutacións asociadas a tumores eran un 19,5% dependentes do ADNc cunha especificidade do 90% 34. Ademais, os pacientes que sufriron unha invasión vascular tiñan máis probabilidades de desenvolver ADNc.мутация (P = 0,041) e более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutación (P=0,041) e unha supervivencia sen enfermidade máis curta (P<0,001).Outro xene condutor común do HCC é o TP53, que ten unha taxa de mutación superior ao 30%.Os estudos demostraron que a frecuencia das mutacións de TP53 no ADNc en sangue e ouriños varía entre o 5% e o 60%.35 O estudo de Johan demostrou que o espectro de mutacións do ctDNA no CHC tardío ten unha taxa de mutación similar á do CHC precoz, incluíndo o promotor TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutacións en AXIN1 ., ARID2, KMT2D e TSC2 (6 % cada unha).36 O oncoxene β-catenina (CTNNB1) xoga un papel importante na vía de sinalización de Wnt.O coactivador da transcrición CTNNB1 pode promover a expresión xénica, o que pode levar á proliferación celular, á inhibición da apoptose e á anxioxénese.CTNNB1 tamén pode interactuar con TERT para inducir a transformación dos hepatocitos.33 O promotor TERT está frecuentemente mutado nalgúns tumores sólidos.As alteracións no TERT, un dos primeiros cambios xenéticos na transformación maligna do CHC, poden levar á reactivación da telomerase nos hepatocitos cirróticos e poden promover a proliferación e previr o envellecemento.Aparecen mutacións no promotor 33-37 TERT no 59-90% dos pacientes con nódulos hepáticos proliferativos e HCC precoz e están asociadas á supervivencia.38
Os cambios de número de copias (CNA) son un subtipo importante de mutacións somáticas.As investigacións demostraron que a carga xeneralizada e focal do CNA é unha sinatura xenómica capaz de predicir a infiltración e exclusión inmune do tumor nalgúns tipos de cancro.39 Sinalización activa de infiltración, actividade citolítica elevada, inflamación severa e marcadores xenéticos asociados á presentación de antíxenos no CHC.A análise da matriz de datos de polimorfismos dun único nucleótido en 477 suxeitos revelou unha baixa carga sobre o SNC.Pola contra, os tumores cromosómicamente inestables cunha alta carga extensa de CNA mostraron signos de rexeitamento inmune e estaban asociados á proliferación, reparación do ADN e disfunción de TP53.Xu et al.mostrou que o grupo HCC tiña puntuacións CNA máis altas que o grupo de enfermidade hepática crónica.40 Usando a secuenciación do xenoma completo dunha soa célula, descubriuse que os CNA aparecen cedo na hepatocarcinoxénese e permanecen relativamente estables durante a progresión do tumor.41 Chung et al.descubriu que os niveis de cfDNA estaban significativamente elevados en pacientes con HCC e que os CNA de todo o xenoma no cfDNA eran un importante marcador pronóstico independente en pacientes con HCC tratados con sorafenib.42 Os pacientes cunha maior carga de CNA tiñan máis probabilidades de ter progresión da enfermidade e morte que aqueles con menor carga de CNA.Ollerich et al.descubriu que o índice de inestabilidade do número de copias (CNI) pode usarse para avaliar o CNA no cfDNA de pacientes con cancro.Observaron que os pacientes con cancro avanzado tiñan puntuacións de CNI significativamente máis altas que un grupo de control, que avalía a resposta do paciente á quimioterapia e inmunoterapia sistémicas.43 Estes resultados suxiren que os CNA atopados en mostras de biopsias líquidas poden servir como indicadores pronósticos en pacientes con cancro avanzado.HCC sobre o fondo da terapia sistémica.
Actualmente, os métodos utilizados para detectar o ADNc poden dividirse en métodos dirixidos e non dirixidos.En resumo, métodos específicos como a reacción en cadea da polimerase dixital (dPCR), a PCR dixital BEAMing, a PCR do sistema de mutación refractaria de amplificación, Capp-Seq e Tam-Seq son moi sensibles aos xenes predefinidos.Os métodos fóra do obxectivo, como a secuenciación do xenoma completo e a NGS proporcionan unha visión completa de todo o panorama xenómico.44 En comparación cos paneis obxectivo, a secuenciación do xenoma completo pode detectar non só mutacións puntuais e insercións, senón tamén rearranxos e variacións do número de copias.prognóstico, e CTC e cfDNA son bos indicadores que se poden usar para o seguimento dinámico do HCC.45 Ademais, a análise do cfDNA pode ser máis útil para detectar o HCC.Yan et al.mostrou que o ADNc no plasma de pacientes con HCC foi significativamente maior que en pacientes con fibrose hepática e controis sans.En comparación coa AFP, espérase que o ctDNA sexa un mellor marcador de detección do HCC precoz.46 Nun estudo prospectivo de 47 biopsias líquidas que probaron cfDNA e proteínas nunha poboación de poboación, mostráronse eficaces para diferenciar pacientes con CHC dos pacientes sen CHC.Nun seguimento de 331 pacientes con ecografía normais e AFP negativos, a sensibilidade e especificidade do ADNc para diagnosticar o CHC foron do 100% e do 94%, respectivamente, polo que o ADNc podería detectar o CHC en individuos seropositivos de HBsAg asintomáticos.No estudo Yeo48, atopouse unha alta frecuencia (92,5%) de hipermetilación do promotor RASSF1A en pacientes con CHC.Ademais, Xu et al.creou un modelo de diagnóstico para predicir o CHC utilizando un panel de marcadores de metilación específicos cunha especificidade e sensibilidade do 90,5% e do 83,3%, respectivamente.O panel permite distinguir os pacientes con HCC dos pacientes con outras enfermidades hepáticas, o que é mellor que AFP.Tamén descubriron que os controis normais que resultaron positivos poden ter factores de risco para o CHC, como a infección por VHB ou un historial de consumo de alcohol.25 Temos a hipótese de que os factores de alto risco para o HCC poden promover a hipermetilación do ADNc, que despois contribúe á progresión do HCC, e polo tanto, o ADNc pode desempeñar un papel fundamental na selección de grupos de alto risco.Cai et al.resumen a gama completa de mutacións do ADNc e ofrecen unha estratexia sólida para avaliar a carga tumoral en pacientes.49 Esta estratexia pode identificar a tumorigénesis unha mediana de 4,6 meses antes do cambio de imaxe e mostrou un rendemento diagnóstico superior en comparación cos biomarcadores séricos AFP, AFP-L3 e PIVKA-II.O valor diagnóstico das probas de ADNc demostrouse cando a avaliación da imaxe non está dispoñible, polo que as probas de ADNc son de valor no diagnóstico de CHC precoz en grupos de alto risco.Recentemente, os científicos utilizaron a tecnoloxía NGS para analizar indicadores de variación xenética multivariada (incluíndo 5-hidroximetilcitosina, motivo 5′, fragmentación, trazo de nucleosomas, HIFI) en 3204 mostras clínicas e ADNc.50 Os modelos HIFI revalidados con tres conxuntos independentes de tren, proba e proba mostraron unha discriminación estable e fiable entre poboacións HCC e non HCC cunha sensibilidade do 95,79% e 95,42% en conxuntos de proba e proba específicos de HCC, respectivamente.Os sexos foron o 95,00% e o 97,83%, respectivamente.O valor diagnóstico do método HIFI é superior ao da AFP para distinguir o CHC da cirrose.Ademais, o ADNc tamén se usa no tratamento cirúrxico.Atsushi et al.determinou os niveis séricos preoperatorios de ADNc en pacientes con CHC e descubriu que a taxa de recorrencia e a taxa de metástase extrahepática no grupo de ADNc positivo eran significativamente máis altas que no grupo de ADNc negativo, e os niveis de ADNc estaban significativamente correlacionados.con progresión tumoral.51 Ao ser un biomarcador moi sensible, o ADNc pode predecir a capacidade do HCC para invadir os vasos.Wang et al.realizou a secuenciación do xenoma completo de 46 pacientes con HCC, e a análise multivariante mostrou que o valor limiar da frecuencia do alelo da variante de ADNc para a invasión en microvasos é do 0,83%, a sensibilidade do 89,7% e a especificidade do 80,0%.un factor de risco independente para a invasión microvascular no CHC resecable, o que suxire que o ADNc pode axudar a guiar o tratamento óptimo.En conclusión, o ADNc está totalmente implicado na aparición e desenvolvemento do HCC e pódese usar para a detección precoz, a avaliación cirúrxica e o seguimento da enfermidade.
As CTC son células malignas derivadas de tumores primarios ou metástases que metastase no torrente sanguíneo.As células tumorais segregan metaloproteinases da matriz (MMPs), que rompen a membrana basal, permitindo que as células tumorais entren directamente nos vasos sanguíneos e linfáticos.Non obstante, a maioría dos CTC elimínanse rapidamente mediante anoikis, ataques inmunes ou tensión de cizallamento.53 A transición epitelial-mesénquimal (EMT) permite que os CTC se illen facilmente do tecido tumoral primario, invadan os capilares e adquiran unha supervivencia, metástase, invasividade e resistencia aos fármacos significativamente melloradas.Os estudos demostraron que existe unha profunda heteroxeneidade entre as distintas células tumorais nos tumores metastásicos primarios.Así, a análise CTC pode levar a unha comprensión completa da heteroxeneidade das células tumorais.54
Os marcadores específicos para os CTC asociados a HCC inclúen glipican-3 (GPC3), o receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), a molécula de adhesión de células epiteliais (EpCAM) e os marcadores asociados a células nai como CD44, CD90, 55 e a molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM1).) .56 O marcador GPC3 é unha proteína ancorada á membrana celular que se usa clinicamente para a análise patolóxica e a caracterización do HCC.57 A expresión de GPC3 é máis común nas células tumorais do HCC con diferenciación intermedia e baixa e promove a migración extrahepática;ademais, a presenza de CTC GPC3+ indica HCC metastásico.58 A ASGPR é unha proteína transmembrana que se expresa só na superficie dos hepatocitos e está moi expresada no CHC ben diferenciado.EpCAM é unha das proteínas asociadas á membrana máis utilizadas para capturar CTC.EpCAM identificouse como un marcador de superficie de células HCC con características de células nai,59 que se correlaciona con varias características clinicopatolóxicas do HCC, como a invasión vascular, os niveis de AFP avaliados e o estadio avanzado de cancro de fígado no Hospital de Barcelona (BCLC).O fenotipo 60 CTC EMT é altamente metastásico.54 Os procesos EMT no CTC promoven a metástase do HCC.A expresión de marcadores EMT como vimentina, torsión, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, caracol, babosa e E-cadherina foron estudadas en CTC derivados do fígado de pacientes con HCC.58 O sistema CanPatrol™ desenvolvido por Cheng [61] clasificou os CTC en tres subgrupos fenotípicos baseados en marcadores predominantemente expresados: fenotipo epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenotipo mesenquimal (vimentina, enrolado) e fenotipos mixtos.En 176 pacientes, o CTC total foi superior á AFP na diferenciación do HCC da enfermidade hepática benigna.Os valores de AUC para CTC total, AFP e CTC total combinado e AFP foron 0,774 (IC 95%, 0,704-0,834), 0,669 (IC 95%, 0,587-0,750) e 0,821 (IC 95%, 0,756-0,88). ).), respectivamente.A clasificación CTC baseada na EMT pode predecir o diagnóstico de HCC, a recorrencia precoz, a metástase e un tempo global máis curto.
Actualmente, os métodos para detectar CSC inclúen métodos físicos e métodos biolóxicos.Os métodos físicos, a miúdo denominados enriquecemento baseados en propiedades biofísicas, dependen principalmente das propiedades físicas do CSC, como tamaño, densidade, carga, mobilidade e deformabilidade.Dependendo das propiedades físicas, existen varios métodos como sistemas baseados en filtración, dielectroforese, etc. Este último, tamén coñecido como enriquecemento baseado en inmunoafinidade, baséase principalmente na unión antíxeno-anticorpo xa que o método utiliza anticorpos contra biomarcadores específicos do tumor. como EpCAM, ASGPR, receptor 2 do factor de crecemento epidérmico humano (HER2), antíxeno prostático específico (PSA), pancitoqueratina humana (P-CK) e carbamoil fosfato sintase 1 (CPS1).62 Outro tipo, chamado método sen enriquecemento, utiliza a citometría de fluxo para diferenciar os CTC dos leucocitos baseándose nunha proporción e tamaño máis elevados entre nuclear e citoplasmático.Actualmente, a única proba aprobada pola FDA para a detección de CTC é o sistema Cell-Search™, que utiliza o marcador de superficie celular EpCAM. Non obstante, a detección combinada de CTC baseada en marcadores podería aumentar a taxa de positividade.54 Unha mestura de anticorpos contra ASGPR e CPS1 logrou unha taxa de detección de CTC do 91% en pacientes con HCC.63 Zhang et al utilizaron un chip CTC con anticorpos contra ASGPR, P. -CK e CPS1, e diferenciou pacientes con CHC dos pacientes con enfermidade hepática benigna ou cancro non CHC a unha taxa do 100%.64 Un estudo realizado por Wang detectou CTC EpCAM+ no 60% de 42 pacientes con CHC e atopou correlacións significativas entre ambas as positividades. e o número de CTC con estadio TNM.65 Guo et al descubriron que unha puntuación de PCR derivada de CTC foi elevada en 125/171 (73%) pacientes cuxo nivel de AFP era <20 ng/ml cunha sensibilidade do 72,5% e un especificidade do 95,0%, en comparación co 57,0% e 90,0% para AFP cun límite de 20 ng/ml.66 A combinación de AFP e CTC pode mellorar a detección do HCC.45 Crese que os CTC teñen unha vantaxe sobre AFP no cribado precoz dos grupos. con alto risco de HCC. Non obstante, a detección combinada de CTC baseada en marcadores podería aumentar a taxa de positividade.54 Unha mestura de anticorpos contra ASGPR e CPS1 logrou unha taxa de detección de CTC do 91% en pacientes con HCC.63 Zhang et al utilizaron un chip CTC con anticorpos contra ASGPR, P. -CK e CPS1, e diferenciou pacientes con CHC dos pacientes con enfermidade hepática benigna ou cancro non CHC a unha taxa do 100%.64 Un estudo realizado por Wang detectou CTC EpCAM+ no 60% de 42 pacientes con CHC e atopou correlacións significativas entre ambas as positividades. e o número de CTC con estadio TNM.65 Guo et al descubriron que unha puntuación de PCR derivada de CTC foi elevada en 125/171 (73%) pacientes cuxo nivel de AFP era <20 ng/ml cunha sensibilidade do 72,5% e un especificidade do 95,0%, en comparación co 57,0% e 90,0% para AFP cun límite de 20 ng/ml.66 A combinación de AFP e CTC pode mellorar a detección do HCC.45 Crese que os CTC teñen unha vantaxe sobre AFP no cribado precoz dos grupos. con alto risco de HCC.Non obstante, a detección combinada de CTC baseada en marcadores pode aumentar a porcentaxe de resultados positivos.54 Unha mestura de anticorpos anti-ASGPR e CPS1 logrou unha taxa de detección de CTC do 91 % en pacientes con HCC.63 Zhang et al.utilizou un chip CTC con anticorpos contra ASGPR, P-CK e CPS1, e tamén distinguiu pacientes con HCC dos pacientes con enfermidade hepática benigna ou non HCC a unha taxa do 100%.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frecuencia e número de CTC con estadio TNM.65 Guo et al descubriron que a PCR derivada dos CTC estaba elevada en 125/171 (73%) pacientes que tiñan niveis de AFP <20 ng/mL cunha sensibilidade do 72,5% e unha especificidade de 95,0% en comparación co 57,0% e 90,0% para AFP a un nivel de corte de 20 ng/ml.66 A combinación de AFP e CTC pode mellorar a detección de HCC.45 Considérase que os CTC teñen unha vantaxe sobre AFP no cribado precoz. grupos.cun alto risco de HCC.Non obstante, a detección combinada de CTC baseada en marcadores pode aumentar a porcentaxe de resultados positivos.54 Unha mestura de anticorpos anti-ASGPR e CPS1 logrou unha taxa de detección de CTC do 91% en pacientes con HCC.63 Zhang et al.utilizou chips CTC con anticorpos contra ASGPR, P-CK e CPS1 e distinguiu pacientes con HCC de enfermidade hepática benigna e non HCC cun 100%.64 O estudo de Wang identificou o 60% dos CTC EpCAM+ en 42 pacientes con HCC e atopou unha correlación significativa entre a incidencia e o número de CTC na fase TNM. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 为 为 72,5%， 特异性 为 95,0%， 而 ， 在 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， 敏感性 为 为 为 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 ， ， ，截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 截止值 特异性 特异性 特异性 特异性 为 为 为 为 为 为 57,0% 和65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. descubriu que en 125/171 (73%) pacientes con niveis de AFP <20 ng/ml, os valores de PCR derivados de CTC foron elevados cunha sensibilidade do 72,5% e unha especificidade do 95,0%, mentres que a AFP estaba na especificidade de corte. foi de 20 ng/ml.ml foi 57,0% e 90,0%.66 A combinación de ORP e CTC mellora a detección do HCC.Pénsase que 45 CTC son superiores á AFP no cribado precoz de poboacións de HCC de alto risco.Así, para os grupos de HCC positivos para CTC e de alto risco, as probas de CTC deberían combinarse rutineiramente coa detección de ultrasóns e AFP.Non obstante, os CTC considéranse importantes predictores de metástase e recorrencia do tumor, e a detección de CTC non se recomenda de forma independente como ferramenta de diagnóstico.62 Polo tanto, o CTC pode servir como un mellor biomarcador preditivo que outros marcadores utilizados actualmente. Zhou et al descubriron que os pacientes cun número elevado de CTC EpCAM+ e células T reguladoras mostraron un maior risco de desenvolver recorrencia de HCC, que aqueles con baixo número de CTC, cunha proporción de recorrencia do 66,7% fronte ao 10,3% (P < 0,001).67 Un estudo similar foi informado por Zhong et al.68 Ademais, Qi descubriu que 101 de 112 pacientes (90,81%) con HCC, incluídos aqueles con enfermidade en fase inicial, foron positivos para CTC e que se detectaron nódulos moi pequenos de HCC despois de 3 anos. a 5 meses de seguimento. Zhou et al descubriron que os pacientes cun número elevado de CTC EpCAM+ e células T reguladoras mostraron un maior risco de desenvolver recorrencia do HCC que aqueles con baixo número de CTC, cunha proporción de recorrencia do 66,7% fronte ao 10,3% (P < 0,001).67 A estudo similar foi informado por Zhong et al.68 Ademais, Qi descubriu que 101 de 112 pacientes (90,81%) con HCC, incluídos aqueles con enfermidade en fase inicial, foron positivos para CTC e que se detectaron nódulos moi pequenos de HCC despois de 3 a 5 meses de seguimento. Чжоу e др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al descubriron que os pacientes con CTC EpCAM+ elevados e células T reguladoras tiñan un maior risco de recurrencia de HCC que aqueles con CTC baixos, cunha taxa de recorrencia do 66,7% fronte ao 10,3% (P<0,001)67.Un estudo similar foi realizado por Zhong et al.68. Ademais, Qi descubriu que 101 de cada 112 pacientes (90,81%) con HCC, incluídos aqueles con enfermidade precoz, tiñan CTC e que se detectaron nódulos moi pequenos de HCC despois de 3 a 5 meses de seguimento. Zhou 等 人 发现 ， 与 CTC 数量 较 少 的 患者 相比 ， EpCAM+ CTC 和 调节性 T 细胞 数量 升高 的 患者 发生 发生 发生 复发 风险 更 高 ， 复发率 分别 为 为 66,7% 和 Zhou 等 人 发现 与 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 ， epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为p <0.001)。。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу e др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.descubriu que os pacientes con CTC EpCAM+ elevados e células T reguladoras tiñan un maior risco de recurrencia de HCC en comparación con pacientes con menos CTC, con taxas de recorrencia do 66,7% e do 10,3%, respectivamente (P <0,001).Un estudo similar foi informado por Zhong et al.68 Ademais, Qi descubriu que 101 dos 112 pacientes con HCC (90,81%), incluídos os pacientes con enfermidade precoz, tiñan resultados positivos de CTC e atoparon nódulos moi pequenos de HCC despois de 3 visitas.Observación ata 5 meses.Tamén atoparon CTC en 12 pacientes con infección crónica por VHB e atoparon pequenos tumores de HCC en 5 meses en 2 pacientes con CTC positivo.69 Así, os CTC pódense usar para predicir o CHC, 70 pero poden usarse de xeito máis rutineiro como biomarcadores preditivos.
Do mesmo xeito que o cfDNA, o cfRNA é liberado ao torrente sanguíneo a través de varios sistemas.Estas moléculas no sangue periférico representan o tecido canceroso de orixe.En comparación cos marcadores detectados por métodos non invasivos, os cfRNA están máis regulados dinámicamente, específicos de tecidos e abundantes no medio extracelular.A importancia e o valor diagnóstico de 71 miRNAs (miRNAs) no HCC foron informados en moitos estudos.Os miARN son ARN endóxenos non codificantes (ARNnc) que regulan diversas actividades biolóxicas moleculares inhibindo a tradución dos ARN mensaxeiros diana (ARNm).Os miARN están localizados en corpos apoptóticos encapsulados en exosomas, pero tamén poden unirse de forma estable a proteínas séricas e lípidos no sangue periférico e poden usarse para avaliar o CHC.Os microARN están implicados na rexeneración do fígado, o metabolismo dos lípidos, a apoptose, a inflamación e o desenvolvemento do HCC.72 Os miARN oncoxénicos como miR-21, miR-155 e miR-221 son ben coñecidos no CHC.En particular, o miR-21 xoga un papel fundamental na síntese de coláxeno na matriz extracelular e na fibrose e promove a hepatocarcinoxénese ao activar as células nai hematopoéticas.72,73 Os miARN supresores de tumores no HCC inclúen miRNA-122, miRNA-29, a familia Let-7 e a familia miRNA-15.A familia Let-7 está formada por moitos miARN supresores de tumores que teñen como obxectivo a familia RAS.A familia miR-15 inclúe miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 e miR-497, que teñen secuencias complementarias para certos ARNm.Ademais, os ARN longos non codificantes (lncRNAs) e os ARN circulares (cirRNAs) tamén son importantes para a detección precoz do HCC.Os ARNnc representan a clase máis ampla de ARNnc, incluíndo os ARNnc semellantes ao ARNm, e están implicados na patoxénese de moitas enfermidades humanas.Os LncRNA xogan un papel regulador no microambiente hepático e na enfermidade hepática crónica.74 Os ARNc tamén son unha clase de ARNnc con múltiples funcións na regulación da expresión xénica.Recentemente, os circRNA foron considerados como ferramentas de diagnóstico para o CHC.
O ARN libre circulante ten unha estabilidade notable, incluíndo a resistencia á temperatura, pH e RNase, o que fai que o illamento do ARNfn do sangue periférico sexa menos tedioso mediante os métodos estándar de purificación de ARN.Os métodos máis utilizados inclúen NGS, microarrays e RT-qPCR.O NGS permite medir os microARN en todo o xenoma.Non obstante, este método é caro e a análise non está estandarizada.Pola contra, a RT-qPCR é barata, amplifica rapidamente os ácidos nucleicos e ofrece moitas vantaxes como maior sensibilidade, maior precisión, rango dinámico máis amplo e requirir menos mostras.As micromatrices son outro método usado para a detección de miARN baseado na hibridación sensible e específica de miARN diana con sondas de ADN complementarias, 75 pero a análise dos datos de microarrays leva moito tempo.
A circulación de miR-122 e Let-7 informouse de ser potencialmente útil no diagnóstico de CHC en estadio inicial en grupos de alto risco, marcadores en pacientes con nódulos premalignos asociados ao VHB e CHC en estadio precoz.76 Cai et al.descubriu que os membros da familia Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 e miR-199a/b) están en risco de padecer crónicos. HCC en pacientes con hepatite.A familia Let-7 pode servir como un biomarcador substituto eficaz para predecir o desenvolvemento do CHC en grupos de alto risco asociados á hepatite C crónica. 77 miR-122 ten unha alta precisión diagnóstica na detección precoz do CHC en pacientes con cirrose hepática.78 O MiR-107 circulante do soro tamén foi avaliado nas fases iniciais do CHC, 79 e mostrou un bo potencial en poboacións de alto risco.Zhou et al informaron de que un panel de miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a e miR-801) pode diferenciar o HCC da hepatite B crónica (CHB) e da cirrose. a sensibilidade foi do 79,1% e do 75%, e a especificidade do 76,4% e do 91,1%, respectivamente.80 No HCC relacionado co VHB, descubrimos que os niveis de miR150 reducíronse significativamente en comparación cos dos pacientes crónicos con VHB sen HCC (sensibilidade 79,1%, especificidade 76,5%).-224 foi elevado no CHC en comparación cos controis sans, e as análises de subgrupos mostraron niveis máis altos en pacientes con CHC asociado con HBV.Os pacientes con cirrose asociada á hepatite B e HCC identificaron un clasificador de siRNA que contén sete siRNAs expresados ​​de forma diferencial que poden detectar o HCC en diferentes controis;O rango AUC na detección precoz é mellor que os voluntarios da AFP.Descubriron que catro miRNAs (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p e miR-365a-3p) podían distinguir aos pacientes con HCC dos pacientes sen HCC.Cinco miRNAs sobreexpresados ​​(miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p e miR-148a-3p) considéranse posibles infeccións por VHB en HCC, cirrose e biomarcadores de CHB, especialmente miR-34a-5p poden ser biomarcadores para a cirrose hepática85 e poden ser biomarcadores potenciais para a detección precoz do CHC en poboacións de alto risco.O lncRNA máis estudado no HCC está altamente activado no cancro de fígado (HULC).Outros estudos demostraron que o HULC que circula en pacientes con HCC pode usarse como marcador diagnóstico porque este lncRNA está altamente regulado en pacientes con HCC en comparación cos individuos sans.71,86 Entre outros lnRNAs, LINC00152 considérase o mellor lncRNA diagnóstico debido ao seu elevado AUC, sensibilidade e especificidade.86 Nun estudo, a expresión no sangue periférico de LINC00152 aumentou gradualmente desde os controis normais e saudables ata os pacientes con CHB e cirrose, e finalmente foi máis alta no CHC.Estudos sobre a expresión de circSMARCA5 no plasma de pacientes con CHC mostraron un descenso progresivo da expresión do CHC que vai dende hepatite ata cirrose e lesións precancerosas.87 A análise das curvas ROC confirmou o potencial destes circRNAs para distinguir pacientes con hepatite ou cirrose hepática dos pacientes con HCC, especialmente aqueles con niveis de AFP inferiores a 200 ng/mL.Ademais, Zhu analizou 13.617 ARN cíclicos en mostras de plasma de pacientes con HCC asociados ao VHB e confirmou que 6 ARN cíclicos se expresaban de forma diferente no HCC e na cirrose asociada ao VHB, o que suxire que os cRNA poden ser beneficiosos.marcadores para a detección precoz de grupos de alto risco, como os asociados con enfermidades hepáticas, pacientes con esclerose.88
Os exosomas son vesículas de membrana de 40-160 nm de diámetro;múltiples vesículas intracelulares fusionan coa membrana celular e son liberadas na matriz extracelular.Conteñen moitos compoñentes activos, incluíndo lípidos, proteínas, ARN e ADN, e desempeñan un papel fundamental na comunicación entre as células, tanto células HCC como non HCC.89,90 Os exosomas regulan a progresión do HCC activando os fibroblastos de hepatocitos e as células estrelladas, as células inmunes, os hepatocitos normais e as células HCC.91 No microambiente tumoral, as células tumorais producen un gran número de exosomas que son transportados desde as células cancerosas ata as células inmaduras, que á súa vez están implicadas na oncoxénese, degradación e sinalización celular.92 Os estudos demostraron que os exosomas poden transferir oncoxenes ás células normais durante procesos patolóxicos, que poden ser un dos mecanismos de invasión tumoral e metástase.93 O papel dos exosomas na progresión do cancro pode ser dinámico e específico do tipo de cancro, 89 Os exosomas poden ser interiorizados por células adxacentes ou distantes para regular varios xenes diana nas células receptoras que poden estar implicados nos ións de comunicación intercelular e nas interaccións do microambiente celular. mediar a sinalización celular e o metabolismo.94 As características e os cambios dinámicos das moléculas de carga de exosomas reflicten directamente as características e os cambios dinámicos das células tumorais parentais,95 que tamén é a base para o uso de exosomas no diagnóstico e prognóstico do cancro, así como para predecir a resposta individual á terapia contra o cancro. ..96
Os métodos tradicionais de laboratorio para illar e analizar exosomas son complexos, de varios pasos e lentos, incluíndo ultracentrifugación, filtración, cromatografía de exclusión de tamaño, purificación de inmunoafinidade, transferencia Western, ensaio inmunoabsorbente ligado a encimas (ELISA), PCR e análise de fluxo.Os sistemas miniaturizados e as plataformas lab-on-a-chip que utilizan micro/nanotecnoloxía están sendo amplamente desenvolvidos para un illamento in situ rápido e cómodo de exosomas.A análise de seguimento de nanopartículas (NTA) é un método moi utilizado para caracterizar o tamaño e a concentración de exosomas, incluíndo métodos como as nanopartículas magnéticas e os polihidroxialcanoatos.Os métodos microfluídicos e electroquímicos tamén poden detectar rapidamente exosomas con altos rendementos.
As proteínas exosomáis son marcadores importantes para o diagnóstico do CHC.No estudo de Arbelaiz, o nivel de proteína de unión SH3 RasGAP 98 (G3BP) e receptor polimérico de inmunoglobulina (PIGR) aumentou significativamente nos exosomas derivados do HCC, e a suposta eficacia combinada das dúas proteínas foi superior á da AFP.A sobrecarga de ferro é un factor importante que contribúe ao desenvolvemento do HCC.Tseng informou de que a hepcidina pode desempeñar un papel fundamental na resistencia ao HCC.99 Os exosomas derivados dos soros de pacientes con CHC tiñan un número de copias significativamente maior de variantes de ARNm de hepcidina que os seus homólogos sans, o que suxire que a hepcidina pode ser un novo biomarcador diagnóstico do CHC.A proteína 14-3-3ζ dos exosomas producida por 100 HCC pode reducir a activación, proliferación e diferenciación das células T e pode inducir a transformación dos linfocitos T en células T reguladoras, o que provoca o esgotamento das células T.101 Isto está apoiado por varios estudos que investigan a evasión de tumores pola vixilancia inmune, 102 que poden contribuír á tumorigénesis do CHC.
Ademais da presenza de ecRNA no plasma ou no soro, os exosomas enriquecidos con ARN pódense utilizar para estadificación non invasiva en tempo real na detección precoz de tumores e para determinar a evolución do tumor e a resposta á terapia.O nivel de miRNA-21 exosomal no soro sanguíneo no grupo HCC foi 2,21 veces maior que no grupo CHB, e no grupo HCC foi 5,57 veces maior que na poboación sa.No estudo de Wang, os exosomas aumentaron significativamente o HCC en comparación cos pacientes cirróticos con valores de AUC de 0,83 (IC 95% 0,74-0,93) e 0,94 (IC 95% 0,88-1,00).104 Os datos obtidos dilucidaron a implicación de moléculas específicas de carga exosomal na regulación da oncoxénese e a progresión do HCC.105 A expresión sérica de miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 e miR-26a é consistente.e metástase, e os niveis de miR21 foron moito máis altos nos pacientes con CHC que nos controis sans e tamén nos pacientes con CHB.102 O LncRNA tiña un valor diagnóstico potencial no CHC.Os estudos demostraron que os exosomas derivados dos soros de pacientes con HCC teñen niveis significativamente máis altos de LINC00161, LINC000635 e ARNlnc activados ao transformar o factor de crecemento-β que en pacientes sen HCC, e estes ARNlnc están fortemente asociados co estadio TNM e co volume do tumor.110 Conigliaro et al.Descubriuse que os exosomas CD90+ expresan altos niveis de lncRNAH19, o que aumentou significativamente a liberación do factor de crecemento endotelial vascular (VEGF) e a produción de receptores de VEGF-R1, estimulando así a anxioxénese.93 Os ARNcr son outro tipo de ARNnc exosomal: expresados ​​a niveis máis baixos pero estables entre especies, os ARNcr tamén mostran especificidade polo tipo de célula, o tipo de tecido, o estadio de desenvolvemento e a actividade reguladora.Os circRNAs 111 son biomarcadores de diagnóstico para o cancro precoz e minimamente invasivo.112 Ensaios clínicos recentes demostraron que a especificidade dos miARN individuais para predicir o HCC non é ideal.Polo tanto, a detección complexa mediante múltiples ensaios (por exemplo, miR-122 e miR-48a en combinación con AFP) pode mellorar a identificación do HCC precoz e a diferenciación do HCC da cirrose.100
Os pacientes con CHB e cirrose hepática son o grupo de alto risco máis común de desenvolver CHC.Para os grupos de alto risco, unha vez conseguida unha resposta virolóxica sostida, débese desenvolver unha estratexia de vixilancia rendible baseada no risco de CHC, e o cribado precoz é a clave para mellorar o diagnóstico e tratamento do CHC cunha alta relación custo-eficacia2. ..Os métodos de detección precoz do cancro teñen moitas limitacións: non se desenvolveron métodos de cribado precoz efectivos para a maioría dos tipos de cancro e a adhesión adoita ser baixa.En comparación cos métodos tradicionais de detección precoz, a tecnoloxía de biopsia líquida ten vantaxes obvias: facilidade de toma de mostras, detección de panrac, boa reproducibilidade da mostra e resposta eficaz á heteroxeneidade do tumor.Dada a relación custo-eficacia dos métodos asociados á biopsia líquida, o seu uso no cribado de CHC non foi probado de forma rutineira.A pesar dos avances na detección precisa a nivel molecular, a biopsia de fluídos é custosa para detectar o CHC en pacientes obxectivo, o que limita o seu uso xeneralizado en comparación con procedementos de imaxe específicos como a ecografía e a resonancia magnética.113,114 Non obstante, un estudo anterior mostrou que a biopsia líquida mostrou un beneficio significativo en canto aos anos de vida axustados pola calidade (QALY).115 Tamén se demostraron os beneficios da biopsia líquida no carcinoma precoz de estómago e nasofarinxe.116,117 A opinión actual é que a biopsia líquida pode complementar os biomarcadores séricos e o cribado radiolóxico na detección e diagnóstico de tumores.117 118
Segundo a literatura actual, a tecnoloxía da biopsia de fluídos mostrou unha sensibilidade e especificidade significativamente máis altas na detección precoz de grupos de alto risco para o cancro de fígado.Independentemente do tipo de biopsia de fluídos, pode distinguir o CHC de individuos de alto risco sen CHC, o que suxire a importancia da detección precoz xa que as diferenzas entre individuos de alto risco e sans son evidentes.O ADNc ten unha vida media curta e pódese usar para detectar o HCC, polo que calquera cambio no ADNc derivado do tumor pode proporcionar evidencias concretas en tempo real da progresión do tumor, especialmente para tumores pequenos.Un alto nivel de ADNc indica o desenvolvemento e propagación do cancro e é un indicador precoz de progresión e recorrencia.Ademais, en función dos resultados do ctDNA, os pacientes poden recibir tratamento e seguimento individualizados.119 Os sitios específicos de metilación poden ser un mellor marcador que a AFP para a identificación precoz de HCC e nódulos cirróticos.En casos resecables de CHC, os niveis altos de ADNc son indicativos de invasión microvascular e recorrencia e metástase postoperatorias.Os cambios no número de copias están asociados á supervivencia dos pacientes con CHC.Pódese supoñer que a avaliación do ADNc pode estar implicada no tratamento global do HCC, e que o ADNc pode servir como un indicador eficaz da modulación terapéutica.As guías clínicas adoptaron marcadores baseados en mutacións xenéticas específicas no ADNc para predecir a eficacia e controlar a resistencia aos fármacos.A proba de ADNc pode ser a ferramenta de biopsia líquida máis útil para a detección precoz.Os CTC tamén xogan un papel fundamental na detección precoz de grupos de HCC de alto risco.Varios marcadores de CTC asociados ao HCC son de especial importancia no inicio, desenvolvemento e recorrencia do HCC.Como vesículas de membrana, os exosomas están implicados nas comunicacións intercelulares, especialmente nas células HCC.Os microARN circulantes son estables no sangue e, polo tanto, poden ser máis útiles para a detección precoz do HCC.Aos poucos, foron descubertas proteínas exosomáis e exosomas ricos en ARN, e confirmouse a súa eficacia preditiva para o HCC.Curiosamente, diferentes etioloxías do HCC tamén poden estar asociadas con diferentes mutacións, polo que podemos seleccionar diferentes biomarcadores para a detección precoz en función de diferentes etioloxías do HCC.120
Non obstante, as técnicas actuais de biopsia de fluídos son cuestionables en termos de estabilidade e non poden realizar de forma independente a detección precoz ou o seguimento do CHC, pero aínda poden complementar o cribado e o diagnóstico individuais.121 Como unha forma de biopsia líquida, a detección e imaxe de ctDNA, CTC, cfRNA e AFP asociada a exosomas ou PIVKA-II teñen aplicacións prometedoras no diagnóstico precoz e no pronóstico do CHC.Non obstante, aínda está por dilucidar o mecanismo exacto de liberación de ADNc no sangue.Revelar as propiedades biolóxicas básicas do ADNc pode facilitar o seu uso como marcador.A pequena cantidade de ADNc na circulación e os estritos requisitos de manipulación de mostras son retos para a implementación clínica da detección de ADNc no HCC.Ademais, as mutacións xenéticas non teñen características específicas que permitan unha identificación precisa de axentes canceríxenos.Dado que múltiples variantes xenéticas e somáticas tamén están presentes nos tecidos normais, as mutacións xenéticas identificadas pola biopsia de fluídos poden ter unha utilidade limitada na detección precoz do CHC.122 As limitacións das dianas xenéticas útiles ben definidas e dos biomarcadores que axudan a diferenciar o ADNc do ADN non tumoral son os problemas máis importantes no uso do ADNc.falta de utilidade de marcadores sensibles e específicos para a detección de CTC.Só se atoparon células viables con potencial metastásico e non estaba clara a combinación óptima de marcadores enriquecidos con CSC.O illamento de CTC para o cultivo e a avaliación dos seus perfís mutacionais tamén é unha tarefa desafiante.Debido a problemas coa identificación, illamento e purificación de exosomas, o mecanismo molecular específico aínda non está claro, e estudos previos sobre o mecanismo dos exosomas e o HCC non foron en profundidade, e a forma en que os miARN, os lncRNA e as proteínas se clasifican en exosomas. , e non está claro se a captación de exosomas é un proceso de tipo específico.O uso de exosomas para o diagnóstico e tratamento do CHC aínda está en fase preclínica.A falta de estandarización dos procedementos de biopsia líquida, como o tipo de tubos utilizados para recoller sangue, volume sanguíneo, almacenamento e detección de mostras, illamento e enriquecemento, pode impedir o seu uso na práctica clínica habitual debido ás diferenzas nas prácticas entre os centros médicos.A eficacia da biopsia líquida na detección precoz, o diagnóstico, a avaliación da eficacia e a predición do CHC aínda está por explorar, especialmente para os grupos de alto risco.A tecnoloxía da biopsia líquida ten un gran potencial e espérase que se use amplamente na práctica clínica do cancro de fígado nun futuro próximo.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Estatísticas globais de cancro 2020: GLOBOCAN estima a incidencia e a mortalidade de 36 tipos de cancro en 185 países.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Sede da Comisión Nacional de Saúde.Criterios para o diagnóstico e tratamento do cancro de fígado primario (edición 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, et al.Pautas para o diagnóstico e tratamento do carcinoma hepatocelular (edición 2019).Cancro de fígado.2020;9(6):682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, et al.Pautas de práctica clínica para carcinoma hepatocelular: Sociedade Xaponesa de Enfermidades do fígado, 2017 (4ª directrices JSH-HCC), actualización de 2019.Reservorio de enfermidades hepáticas.2019;49(10):1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernández-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsia líquida na enfermidade hepática crónica.Ana Hepato.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biopsia líquida do cancro de mama: unha revisión enfocada.Arch Pathol Lab Med.2021;145(6):678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Vixilancia do carcinoma hepatocelular: mellores prácticas actuais e direccións futuras.Gastroenteroloxía.2019;157(1):54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Asociación Europea de Investigación L, Organización Europea R, C Therapeutics.Pautas clínicas EASL-EORTC: tratamento do carcinoma hepatocelular.J Heparina.2012;56(4):908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Análise combinada de AFP e HCCR-1 como marcadores serolóxicos útiles no carcinoma hepatocelular pequeno: un estudo de cohorte prospectivo.Dis Mark.2012;32(4):265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Expresión diferencial do microARN-125b plasmático na enfermidade hepática asociada ao virus da hepatite B e potencial diagnóstico do carcinoma hepatocelular inducido polo virus da hepatite B.Reservorio de enfermidades hepáticas.2017;47(4):312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Bioloxía e importancia da alfa-fetoproteína no carcinoma hepatocelular.Fígado int.2019;39(12):2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Directrices clínicas para o tratamento do carcinoma hepatocelular na rexión Asia-Pacífico: actualización de 2017.Organización Internacional de Enfermidades Hepáticas.2017;11(4):317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei et al.Valor diagnóstico do soro PIVKA-II só ou en combinación con AFP en pacientes chineses con carcinoma hepatocelular.Dis Mark.2021;2021:8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Cancro de pulmón de células non pequenas Biopsia de líquido humoral non plasmático: máis preto do tumor!célula.2020;9(11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Biopsia líquida: estado actual e perspectivas futuras.Tratamento Oncol Res.2017;40(7-8):404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Biopsia líquida do cancro: unha ferramenta de diagnóstico multimodal en oncoloxía clínica.O Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Ácidos nucleicos no plasma humano.CR Seances Soc Biol Fil.1948;142(3-4):241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Detección avanzada de ADN tumoral circulante mediante análise de tamaño de fragmentos.A ciencia traduce medicina.2018;10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Lonxitude do fragmento de ADN do tumor circulante.Xenes PLOS.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. ADN tumoral circulante: un biomarcador prometedor na biopsia de cancro baseada en líquido.tumor obxectivo.2016;7(30):48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Detección de ADN tumoral circulante en fases tempranas e tardías das neoplasias humanas.A ciencia traduce medicina.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biopsia líquida para análise predictiva mutacional do cancro sólido: perspectiva dun patólogo.J Biotecnoloxía.2019;297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Detección precoz de tumores mediante cribado de ADN de plasma circulante: bombo ou esperanza?Dereito clínico belga.2020;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Efecto do virus da hepatite e do envellecemento na metilación do ADN na hepatocarcinoxénese humana.Histopatoloxía.2010;25(5):647–654.doi: 10.14670/HH-25.647